使用方法：1,、細胞培養(yǎng)器皿的表面包被：以包被濃度為2μg/cm2為例,，用無菌0.006mol/L乙酸將膠原蛋白稀釋到0.012mg/mL。加到相應的培養(yǎng)器皿中，確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面。開蓋在超凈臺上過夜晾干,，也可以在室溫放置1小時后，用PBS洗3~4次后直接使用,。包被好的器皿在4~25℃至少可保存三個月以上的時間,。2、三維膠原凝膠的制備：A,、無細胞三維膠原凝膠的制備（以配制1mg/mL三維膠1mL為例）將200μL本品加到置于冰浴的離心管中,，加入690μL雙蒸水，然后加到12μL0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,，會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結），立即混勻,。再加入100μL10×PBS或10×培養(yǎng)液,，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中（混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,，初次使用時需要測定pH值）,。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后，轉移到培養(yǎng)箱內,。如果配制中使用的是10×PBS,，使用前需要加入適當體積的細胞培養(yǎng)液預平衡。成功建立了利用自制鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細胞的方法,，并且制作簡便,成本低廉,。珠海鼠尾膠原廠家
鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基和一種天然的黏附劑，可用于細胞培養(yǎng)皿的包被,，特別適合普通細胞培養(yǎng)器皿不易貼壁細胞的培養(yǎng),；也可用于制備三維膠原凝膠，使細胞在模擬的三維環(huán)境中生長,。制備鼠尾膠原方法：1,、取大鼠尾巴洗凈，75%酒精浸泡5分鐘；2,、手持尾巴,，用止血鉗夾住鼠尾的較高，折斷尾骨后拉出尾腱,；3,、將尾腱剪斷置于平皿中，生理鹽水浸泡,；4,、重復步驟2、3,，直至尾腱量夠用,；5、吸去生理鹽水,，將尾腱稱重（0.5-1克）,；6、將尾腱置于平皿內剪碎,，轉移至三角燒瓶中,；7、按每克尾腱50ml的比例,，加入0.1%醋酸溶液,；8、搖晃,，使尾腱分散于醋酸溶液中,，4℃放置一星期；9,、離心,，4000轉/分，10-15分鐘,；10,、吸取上清，分裝成小瓶,，4℃保存,。天津鼠尾膠原生產廠家膠原蛋白（Collagen）是結締組織和內臟部位外基質的主要成分。
一種基于鼠尾膠原蛋白：1.一種基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料,，為鼠尾膠原蛋白,、聚乙烯醇、殼聚糖,、水制成的凍干止血材料,，各材料重量配比為鼠尾膠原蛋白聚乙烯醇殼聚糖為1-10%0.2-5%0.2-2%,，余量為水。2.根據(jù)權利要求1所述的基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料,，其特征在于凍干止血材料中,，各材料重量配比為鼠尾膠原蛋白聚乙烯醇殼聚糖為5%2%1%，余量的水,。3.根據(jù)權利要求1或2所述的基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料,，其特征在于鼠尾膠原蛋白來源于各品系SFP級大鼠鼠尾。
生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法,，采用酸法與酶法相結合的工藝,，保持恒低溫無菌的環(huán)境，利用同樣濃度的鹽溶液進行兩次鹽析與離心,，簡化了提純步驟,。所用酸為低濃度酸溶液，并采用檸檬酸替代醋酸進行提純,。從提取原料到樣品生成過程中,，進行多次真空冷凍干燥，并經進一步處理獲得含水率在3％以下的膠原蛋白微粉,；較后由滅菌,、無菌包裝，成品膠原蛋白粉末的純度在98％以上,。本發(fā)明獲得的膠原蛋白降低了蛋白的免疫原性,，提高了產率和生物相容性，降低了成本,，適用于生物醫(yī)用材料,，所得到的膠原蛋白能完整地保留其特有的三股螺旋結構。鼠尾膠原醋酸溶解：稀釋一定數(shù)量的膠原溶液,。
鼠尾膠原膠凝程序：膠原蛋白I按以下步驟使其pH達到堿性時凝膠。1）將無菌5cm左右的紗布海綿貼在150mm培養(yǎng)皿的蓋子上來制備氨蒸氣室,。用氫氧化銨使紗布飽和,，把蓋子放在150mm的培養(yǎng)皿上，暫放置一邊,。2）將膠原蛋白I均勻涂布在要包被物的表面上,，厚度可以根據(jù)需要改變，膠原蛋白I（50-100μL）足以涂覆22mm的蓋玻片,。對于直徑100mm的培養(yǎng)皿,，每個加入約6mL;對于60mm培養(yǎng)皿添加約2.3mL，對于35mm培養(yǎng)皿添加約1mL,。3）將涂有膠原蛋白的蓋玻片或帶有蓋子的培養(yǎng)皿轉移到氨蒸氣室并暴露三分鐘,。4）在無菌蒸餾水中（35mm培養(yǎng)皿加5mL,，60mm培養(yǎng)皿加10mL等）浸泡涂布的蓋玻片或培養(yǎng)皿30min。吸取原蒸餾水并加0.5-1.0mL無菌蒸餾水,，放置在層流罩中過夜,。5）吸出蒸餾水，用含血清的平衡鹽緩沖液溶液代替并保存在2-8°C,。鼠尾膠原蛋白還能用于制備三維膠,。開封鼠尾膠原直銷廠家
鼠尾膠原蛋白 型在濃度1mg/ml 以上， pH 左右時可形成具有一定強度三維膠,。珠海鼠尾膠原廠家
膠原蛋白的提取方法：1.堿法提?。簤A法提取膠原蛋白常用的處理劑為石灰、氫氧化鈉,、碳酸鈉等,。如Holzer等[5]采用1%～1.5%石灰水浸泡的方法提取膠原蛋白。由于它容易造成肽鍵水解,，因此得到的水解產物分子量比較低,。所以，若想保留膠原的三股螺旋結構,，此法不可取,。2.鹽法提取：鹽法提取膠原蛋白所用的中性鹽有鹽酸-三羥甲基胺基甲烷(Tris-HCl),、氯化鈉,、檸檬酸鹽等。在中性條件下,，當鹽的濃度達到一定量時,，膠原溶解。并且可采用不同濃度的氯化鈉對提取的膠原蛋白進行鹽析處理,，可以沉淀出不同類型的膠原蛋白,。珠海鼠尾膠原廠家