要折騰嬌貴的細(xì)胞寶寶,，必須要在無菌超凈環(huán)境下才行,。超凈工作臺，所有的儀器用品提前滅菌，培養(yǎng)箱什么的定期用酒精擦干凈,。微生物污染對細(xì)胞的影響經(jīng)常是開始的時候沒發(fā)現(xiàn),，發(fā)現(xiàn)的時候已經(jīng)結(jié)束了，所以千萬要小心,。除了操作中的各種小細(xì)節(jié),，還有一個實驗雷區(qū)，就是配制細(xì)胞凍存液,。常見的凍存液配制要遵循培養(yǎng)基+血清+DMSO的成分要求,，根據(jù)細(xì)胞實際判斷成分配比，還建議使用程控儀,，注意配制溫度,，一個不小心就又會影響細(xì)胞的存活效果。學(xué)霸君給各位養(yǎng)細(xì)胞的科研汪們帶來一款細(xì)胞神器——WakoBAMBANKER®即用型無血清細(xì)胞凍存液,?？梢栽诒纬芍埃瑑?yōu)先結(jié)合細(xì)胞外的水分子,。廈門貴陽無血清細(xì)胞凍存液

細(xì)胞凍存的基本原理：細(xì)胞代謝過程需要各種蛋白酶的參與,，而這些蛋白酶在環(huán)境溫度低于-70℃時會集體不工作，低溫貯藏的目的是通過較低溫使細(xì)胞代謝活動近乎停止,。細(xì)胞因此進入休眠狀態(tài),，使細(xì)胞“不會老”，所以可以長期保存,。因為凍融過程對所有細(xì)胞和組織都是有一定傷害的,，因此，需要開發(fā)出有效的技術(shù)來防止細(xì)胞死亡和損傷,。低溫保護劑可保護細(xì)胞不受細(xì)胞內(nèi)冰凍影響,，目前多采用DMSO，甘油,，乙二醇和丙二醇等滲透型低溫保護劑,。它們的作用機制包括：自由進入細(xì)胞，取代水,，使冰點下降,，充當(dāng)鹽的二次溶劑，提高細(xì)胞膜對水的通透性,。鄭州正規(guī)無血清細(xì)胞凍存液進貨價無血清細(xì)胞凍存液,，用于各種動物細(xì)胞株（tumour細(xì)胞和常規(guī)細(xì)胞），凍存細(xì)胞可在-80℃長期保存,。

無血清細(xì)胞凍存液的用途：無血清細(xì)胞凍存液,，含多種保護劑成分。一些保護劑，易于穿透細(xì)胞,，避免細(xì)胞內(nèi)部水分子形成冰晶損傷細(xì)胞,，同時另一些保護劑不能穿透細(xì)胞，但可以在冰晶形成之前,，優(yōu)先結(jié)合細(xì)胞外的水分子,，降低細(xì)胞外溶液的電解質(zhì)濃度，減少陽離子進入細(xì)胞的數(shù)量,，為多種保護劑組合,，在細(xì)胞內(nèi)外進行雙重保護，較大提高了細(xì)胞復(fù)蘇存活率,。無血清細(xì)胞凍存液不含牛血清,，無動物源組份。2-8℃即可穩(wěn)定保存,，無需冷凍,，即取即用。凍存細(xì)胞,，無需程序降溫,。凍存細(xì)胞復(fù)蘇率在90%以上,。

產(chǎn)品特性：a.可直接放置于-80℃冰箱,，無需降溫，節(jié)省時間和精力,；b.即用型,，無需現(xiàn)配，操作方便,，可減少實驗中因操作引起的污染,；c.在多種哺乳細(xì)胞系中經(jīng)過性能驗證，其復(fù)蘇率和活率達90%以上,；d.可長期存儲于-80℃冰箱(5年以上),，取用方便；e.采用成分明確的無血清配方,，價格比常規(guī)自配細(xì)胞凍存液更為低廉,；保存溫度：2~8℃具體操作步驟：1、培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中細(xì)胞按常規(guī)方法消化,，或分離獲得原代細(xì)胞后,，收集于離心管中。2,、使用離心機離心,，去除上清，收集細(xì)胞沉淀。3,、根據(jù)細(xì)胞生長密度加入適量的細(xì)胞凍存液進行重懸,，充分混勻(推薦凍存密度為1-2×106/ml)。4,、將細(xì)胞懸液分裝至凍存管中,，直接放置于-80℃冰箱保存。24小時后可移入液氮長期保存(可選),?？焖賰龃婧喕藘龃娌襟E，同時不需要使用梯度凍存盒,。

無血清細(xì)胞凍存液：凍存注意：開蓋之前,，用70%的乙醇或異丙醇擦拭瓶身。以下說明適用于在6孔板內(nèi)的培養(yǎng)物的凍存,。培養(yǎng)物應(yīng)該在適合傳代的時候進行收集和凍存,。每管所含有的細(xì)胞應(yīng)當(dāng)來源于6孔板的1個培養(yǎng)孔。如果使用其他的培養(yǎng)器皿,，請相應(yīng)的調(diào)整體積,。1.在室溫（15-25°C）以300xg離心5分鐘。2.輕輕吸走上清液,，注意不要擾動細(xì)胞團,。3.用血清學(xué)吸管以1mL的TBD-698重懸細(xì)胞。在打散細(xì)胞團時,，盡量減少細(xì)胞聚集體分解,。4.用2mL的血清學(xué)吸管將1mL的細(xì)胞聚集體轉(zhuǎn)移到標(biāo)記好的凍存管中。5.用以下方法凍存細(xì)胞聚集體:推薦使用緩速降溫方法,，每分鐘降低1度,，隨后可以在-196°C液氮長期保存。不推薦在-80°C長期保存,。逐步降溫法：-20°C保存2個小時,，然后-80°C中保存2個小時，隨后可以在-196°C液氮中長期保存,。無血清凍存液用途：本產(chǎn)品請于保質(zhì)期內(nèi)使用,，超過保質(zhì)期，必須放棄使用,。唐山正規(guī)無血清細(xì)胞凍存液推薦廠家

無血清凍存液使用方法：將加有凍存液的細(xì)胞懸液分裝至凍存管中,。廈門貴陽無血清細(xì)胞凍存液

細(xì)胞凍存，我們應(yīng)該注意哪些事項：1,、有文獻表明,，細(xì)胞以l℃/min的速度冷凍存活率較髙,，因為這一速度可以很好的控制細(xì)胞內(nèi)部晶體的產(chǎn)生。我們實際操作不可能將速度控制的這么精確,，目前慣用的就是4℃30min,、-20℃1h30min、-80℃2h后轉(zhuǎn)入液氮中,。2,、正常情況下，經(jīng)過-20℃1h30min這一步后,，凍存管內(nèi)的細(xì)胞已經(jīng)處于凝固狀態(tài),，如果此時凍存管內(nèi)還是液體，很可能是DMSO或冰箱冷凍功能出現(xiàn)了問題,。如若遇到這種情況,，不能因為時間到了，就把把液體狀態(tài)的凍存管放置到液氮中,，可以適當(dāng)延長在-20℃環(huán)境下的冷凍時間30-60分鐘,，直至凍存液凝固后再放到液氮中。廈門貴陽無血清細(xì)胞凍存液